In vitro pokusi su vođene izvan živom organizmu u epruveti ili sličnog okoliš . Znanstvenici mogu napraviti RNA kopija ili prijepis gena in vitro kroz proces nazvan in vitro transkripciju . Enzim koji čini RNK transkripta se temelji na gen nazivaRNA polimeraze . Jedan od takvih molekulaSP6 polimerazom . To zahtijeva protežu od DNK naziva SP6 promotor kako bi pravilno funkcionirao . Promotori

promotor jeregija DNA vezan RNK polimeraze pokrenuti prepisivanje . SP6 polimerazom zahtijevavrlo specifičan slijed prisutan na promotor kako bi se vezati , pa kadase koristi SP6 polimerazom za in vitro transkripciju ,gen mora sadržavati SP6 promotor transkripcije se javljaju . SP6 polimeraze je od vrste virusa zovebacteriophage ; biotehnološke tvrtke proizvode ovu polimeraze koje zaraze bakterije salmonele s fag , a naknadno izoliranje polimeraze .
Expression

Bazalna ekspresija ili se odnosi na razinu izražavanja u nedostatku druge molekule koje će povećati ili smanjiti razinu transkripcije. Aktivatori ili represori , na primjer , su proteini koji se vežu za promotor ili drugi regulatorne regije gena i bilo pomoći u regrutiranje RNA polimerazu ili spriječiti da se veže . Indukciju su molekule koje potaknuti proizvodnju genskog proizvoda podizanjem razine ekspresije .
SP6

Osnovna aktivnost za SP6 promotor će varirati ovisno o uvjetima vaš eksperiment . Najvažnije je, naravno , kako vaši eksperimentalni uvjeti mogu utjecati na djelovanje i kako SP6 u usporedbi s drugim sustavima . U principu , SP6 polimeraze i promotori dostavi manju učinkovitost nego T7 ili T3 in vitro transkripcija sustava , iako je pod idealnim uvjetima SP6 je otprilike usporediva s ove druge dvije. Kao SP6 , i T7 i T3 koristiti RNA polimeraze iz bakteriofagni .

Uvjeti

koncentraciju soli i temperature su dva važna čimbenika u određivanju bazalnu aktivnost . SP6 je vrlo osjetljiv na koncentraciju soli , tako da veće koncentracije soli može smanjiti svoju aktivnost uvelike. Sve ostalo ostaje nepromijenjeno , izraz je znatno veća na 104 stupnjeva celzijusa nego na 99 stupnjeva celzijusa . Koncentracija nukleotida je još jedna važna stvar . Niske koncentracije potencijalno može uzrokovati prepisivanje raskinuti prijevremeno i time smanjiti učinkovitost . Povećanjem koncentracije nukleotida će izbjeći ovaj problem . Ako sinteze RNA probi , međutim , dodao previše neoznačeno nukleotida će smanjiti količinu oznakom nukleotida u konačnom proizvodu .