kolone za gel filtraciju se koriste za odvajanje proteina od složene smjese . Budući da svaki protein ima jedinstvenu molekulsku masu , mogu se odijeliti na različite slojeve ih migraciju kroz kolonu za filtriranje koja sadrži matriks jednoliko distribuira gel . Za ispravno identificirati svaki protein koji se izdvoji , trebat će vam i za kalibriranje stupce pomoću nekoliko proteina poznatih molekularnih weight.Things morat ćete Screenshot ugljičnu anhidrazu Screenshot, citokroma C Screenshot Aprotinin Screenshot bazalnog sol
Centrifugalne epruvete
feritin Screenshot Centrifuga
Pipetira pumpa
250 ml diplomirao cilindar
Buffer tekućina
Znanstveni čišćenje maramice Srpski šprice
Show More upute

1

Uklonite bočica karboanhidraze , citokrom C i aprotininom iz hladnjaka ili zamrzivača i dopustiti im da dođe na sobnu temperaturu . Doda se 4 mg svakog proteina u epruvetu za centrifugiranje po mililitru gela u kolonu za filtriranje . Dodati 961 MCL bazalnog soli po miligramu proteina za svaku epruvetu za centrifugiranje za otapanje proteina . Dodaj 39,2 MCL feritina po mililitru gela u svaku epruvetu , a zatim se miješaju u centrifugi .
2

Isključivanje kolonu za filtriranje i pumpe zatvoriti zaustavni ventil na ulazu u koloni . Odvijte , ali ne skidajte , gornji dio stupca filtracije . Postavite pumpu na maksimalnoj brzini protoka za kolone i ponovno pumpu doktampon materijal je ispusti. Zaustavljanje crpke .
3

Dodati 1 mL od svakog proteina u kolonu za filtriranje pomoću pipete pumpe . Drip proteine ​​dolje unutar stupca s visine od 1 cm do 2 cm , radeći oko unutarnjeg ruba stupca . Dopustiteproteina smjesu da se nasele na vrhu matrici gela .
4

Stavite odvodnu cijev crpke u čistim , suhim 250 ml diplomirao cilindar . Ponovno pokretanje crpke po stopi od 0,30 ml u minuti i pokrenuti proteine ​​u matrici gela . Dokpumpa radi , isperite strane cijevi pomoću kapaljku pumpu i malu količinu tekućine tampon . Nakon što su proteini u potpunosti su ušli u matrici gela , smanjiti brzinu crpke za 0,02 ml u minuti i pumpa u 5 cm x 7 cm sloj tampon tekućinom na vrhu matrice .
5

Isključite stupac kapa iz sigurnosni ventil . Očistite stupca kapu i unutrašnjost kolonu pomoću znanstvene čišćenje maramice . Ponovno instalirajte stupca kapu . Napunite spremnik s tampon tampon tekućinom . Pričvrstite šprice na sigurnosni ventil i otvoriti ga . Pomoću šprice za crtanje malu količinu pufera kroz cijevi i na štrcaljku . Zatvorite zaustavni ventil i ponovno vratiti na stupcu vrhu . Otvorite zaustavni ventil i provjeriti curi .
6

Pokrenite kolumnu na 0,02 ml u minuti za nekoliko dana , dokferitin bend bliži kraju kolone . Prikupiti sve gel filtracije koji se ispumpava u menzuri .